Diabetologia：激活但功能受到影响的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次出新现口内自身抗躯到出新现1同型心血管疾病病理患者的的工业发展率在老年人以前就有极佳的描绘，多个口内自身抗躯无患者的老年人中的有70%在血清转换后10年底患上心血管疾病，而随访15年的老年人这一比重增加到84%。相比较之下，占病理1同型心血管疾病一半以上的同型1同型心血管疾病的确诊机制还无法受益应以有的研究成果。

越来越多的人开始用于分期支配系统来定义1同型心血管疾病的的工业发展：个躯在出新现多种口内自身抗躯时转入第1阶段，出新现血糖异常时转入第2阶段，出新现患者时转入第3阶段。一些多发口内自身抗躯无患者的个躯，在1期和2期，的工业发展较慢，并工业发展为确诊的1同型心血管疾病。我们之前描绘了一第一组在首次验证到多种口内自身抗躯结果显示后至寡10年无心血管疾病的极慢的工业发展者，这第一组病患者总人数寡，但不同之处非常恰当。随后，我们发现口内自身抗原专一性CD8+T亚基质质子化在的工业发展平稳的病患者中的基本上不假定，但在近期确诊和值得注意的心血管疾病病患者中的很容易验证到。这可能表明，与的工业发展病患者相比较，这些病患者自身免疫质子化的平衡增强。

20世纪研究成果表明，尽管平衡性T亚基质(Treg)数目出现异常，但心血管疾病病患者假定一些机制有缺陷，其中的以外对IL-2的质子化能力增加。此外，心血管疾病病患者中的的现像CD4+T亚基质可能对平衡更具抵抗性，乏善可陈为现像T亚基质的减缓逼近，自然导致的Treg和躯外导致的诱发Treg，以及抗原经历的CD4+T亚基质中的IL-2质子化逼近。本研究成果的借此是描绘了CD4+平衡性T亚基质(Treg)在这群人极平稳的工业发展者中的的不同之处，他们的总数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

原理：BOX研究成果是一项以这群人为基础的纵向研究成果，在21岁以下确诊的病患者亲属中的检查1同型心血管疾病的危险因素。我们之前描绘了长期平稳的工业发展者的不同之处，他们保持多重口内自身抗躯无患者超过10年，但无法出新现心血管疾病的病理患者，慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名继续保持无心血管疾病并乐意提供大量肠道结果显示的平稳的工业发展者纳入T和B亚基质机制分析。在目前为止的研究成果中的，8名慢的工业发展者(SP第一组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身抗躯无患者。所有的参加者都属于1同型心血管疾病的工业发展的1期，尽管一些人随后保住了口内自身抗躯对某些抗原的无患者质子化，然而，一名病患者之前属于2期至寡6年，但无法出新现病理患者，一名病患者被诊断为心血管疾病，该病人72岁，在采集实验结果显示时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中的对该NADP顺利进行了直接分析报告。分立外周血单个核亚基质(PBMCs)，采用多参数流式亚基质术和T亚基质减缓试验分析报告NADP中的Treg的频带、遗传和机制。用于FlowSOM和CITRUS(聚类核对、表征和回归)顺利进行无监督聚类分析，分析报告Treg遗传。

结果：与身心健康NADP相比较，来自慢的工业发展躯的失忆CD4+T亚基质的监督聚类辨识，启动时的失忆CD4+ Treg频带增加，与糖皮质激素诱发的TNFR关的亚基(GITR)指出增加有关。一名HbA1c升高的病患者与的工业发展平稳者和冗余的解读第一组相比较，Treg谱大致相同。机制分析表明，与身心健康NADP相比较，来自平稳的工业发展躯的Treg介导的CD4+现像T亚基质减缓轻微受损。乏善可陈为对现像CD4+T亚基质CD25和CD134指出的减缓增加。

由此可知1 深入的遗传分析辨识，CD4+Treg亚同型在慢的工业发展表头中的增加。由FlowSOM填充的Treg房，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -亚基质上。根据标明物指出核对出新10个元簇:失忆T亚基质_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T亚基质;HLA-DR + GITR +失忆T亚基质;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用于9个不同Treg标明填充的10个元簇的MST。每个节点都是一个一个大(100个一个大)，极大的元一个大(10个元一个大)在节点第一组周围上色。每个节点中的的饼由此可知指出单个标明的指出级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以辨识整躯标明指出。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)填充由此可知，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起原子量为每个metacluster箱中央线由此可知(原子量> 0.05%)未确定为HD和SP第一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T亚基质(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T亚基质(l)。粉红色左上角都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检查。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用于CITRUS的预测模同型证实，Treg频带的增加是的工业发展平稳的标志。分级去极化(a - f)和甜菜分析(g-k)比较SP参加者和冗余的HD参加者在CD4+CD45RA−T亚基质上的差异性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的指标性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR指出顺利进行分立，建模FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(布氏)第一组以及NADPSP 606(粉红色)中的CD25+ cd127的频带汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化空集的箱中央线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3指出强度可视，斜线凸显新的簇被识别为SP和HD表头之间的不同。(j)箱中央线由此可知辨识了在SP(布氏)和HD(灰点)第一组中的，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的比起原子量(比重)。(k)直方由此可知辨识每个簇的遗传(粉红色)和Treg标明比起指出与氛围指出(粉红色);上列，存储器Treg_3;比如说即刻，存储器Treg_4。氛围与所有其他簇中的标明的指出有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩检查

由此可知3 与身心健康献血者相比较，的工业发展平稳者失忆treg的GITR增加。每个失忆CD4+T亚基质元簇(失忆T亚基质_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T亚基质;HLA-DR + GITR +失忆T亚基质;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个指出标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的指出热由此可知(sp606不以外在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR指出并联，辨识直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon选取符号秩和检查，p< 0.07(粉红色)所有NADP以外，p< 0.05(粉红色)NADPSP 606和冗余的HD不以外在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR指出，从分级去极化，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)并联，辨识直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取符号秩检查

由此可知4 来自平稳的工业发展的CD4+ treg亚基质支配现像CD4+T亚基质的能力增加。SP第一组用粉红色的中央线和左上角指出，HD第一组用蓝色的中央线和左上角指出，粉红色的中央线/左上角指出NADPsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T亚基质顺利进行分选。CD4+CD25−(应以答者)被标明为CFSE, Treg按推论的比重滴定。用抗CD3 /28微珠重置亚基质，培育出3天内顺利进行流式亚基质术验证。(a-d)与CD4+应以答者比起应以的treg培育出(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应以答者培育出。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE减缓一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓一般而言。用于无患者解读(启动时的声势浩大亚基质内含treg)计算减缓一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 现像CD4+T亚基质对平稳的工业发展的T亚基质重置的减缓更恰当。SP第一组用粉红色的中央线和左上角指出，HD第一组用蓝色的中央线和左上角指出，粉红色的中央线/左上角指出NADPsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T亚基质顺利进行分选。CD4+CD25−(应以答者)被cfsel标明，treg按推论的比重滴定。用抗CD3 /28微珠重置亚基质，培育出3天内顺利进行流式亚基质术(CD25反染)和亚基质因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606应以答者联合培育出。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE减缓百分率(b)。(c,d) CD25减缓百分率(c)和CD134减缓百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在上海交通大学中的的指出。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出新的事实是，来自平稳的工业发展子的重置失忆CD4+Treg在GITR指出中的受益了延展和丰富，忽视了进一步研究成果Treg在1同型心血管疾病风险个躯中的的异质性的全面性。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28